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    产品名称:大鼠促甲状腺激素(TSH)ELISA试剂盒

    别名:大鼠TSH试剂盒;大鼠促甲状腺激素(TSH)ELISA检测试剂盒;大鼠促甲状腺激素(TSH)酶免试剂盒;Rat TSH ELISA KIT

                      大鼠促甲状腺激素(TSH)ELISA试剂盒说明书

    检测原理

    试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被促甲状腺激素(TSH)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的促甲状腺激素(TSH)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

    样品收集、处理及保存方法

    1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

    2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。

    3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。

    4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。

    5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

    自备物品

    1. 酶标仪(450nm)

    2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

    3. 37℃恒温箱

    操作注意事项

    1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

    2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

    3. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

    4. 所有液体组分使用前充分摇匀。

    试剂盒组成

    名称96孔配置48孔配置备注

    微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无

    标准品(4800μIU/L) 0.5mL 0.5mL 无

    标准品稀释液6mL 3mL 无

    样本稀释液6mL 3mL 无

    检测抗体-HRP 10mL 5mL 无

    20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释

    底物A 6mL 3mL 无

    底物B 6mL 3mL 无

    终止液6mL 3mL 无

    封板膜2 张2 张无

    说明书1 份1 份无

    自封袋1 个1 个无

    注:标准品用标准品稀释液倍比稀释为:4800、2400、1200、600、300、150μIU/L

    试剂的准备

    20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20 稀释,即1 份的20×洗涤缓冲液加19 份的蒸馏水。

    洗板方法

    1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min 后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5 次。

    2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5 次。

    操作步骤

    1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

    2. 设置标准品孔和样本孔。标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;待测样本孔先加样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。

    3. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

    4. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5 次(也可用洗板机洗板)。

    5. 每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。

    6. 每孔加入终止液50μL,15min 内,在450nm 波长处测定各孔的OD 值。

    结果判断

    绘制标准曲线:在Excel 工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD 值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

    试剂盒性能

    1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R 值,大于等于0.9900。

    2. 灵敏度:zui低检测浓度小于1.0μIU/L。

    3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

    4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

    5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

    6. 有效期:6 个月

    请以随货英文说明书为准,中文说明书仅供参考。

主营产品:细胞株、Hs578Bst细胞、ND7/23细胞、bel-7407细胞、EA.hy926细胞、A2780细胞、人肝癌细胞株、RAW264.7细胞、NB4细胞、Sp2/0细胞、KYSE30细胞
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